栄養補助食品の誤表示: 品質管理のためのグリーン アイソクラティック HPLC メソッドの開発による、厳選された痩身製品のケーススタディ

Scientific Reports volume 12、記事番号: 22305 (2022) この記事を引用

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この記事に対する著者の訂正は、2023 年 1 月 31 日に公開されました。

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今日、膨大な数の人々が体重を減らすために栄養補助食品を摂取しています。 製品は植物ブレンドであると主張されることがよくありますが、必ずしも安全であるとは限りません。 誤解を招くラベルもよく見られます。 したがって、広範囲の痩身化合物に対する検証済みの分析方法が非常に必要とされています。 ここでは、7 つの人気のある痩身成分を定量するための簡単な HPLC/PDA 法を紹介します。 研究された化合物は、カフェイン、ラズベリーケトン、トランス-レスベラトロール、p-シネフリン、p-オクトパミン、p-ホルデニンおよび2-フェネチルアミンでした。 最適化後、分離は C18 カラムで実行され、移動相はアセトニトリル:0.1% リン酸を含む水の混合物 (50:50、%v/v) でした。 最後の化合物は 9.76 分で溶出しました。 分離は効率的であり、グラジエントプログラム、有機移動相調整剤、または調整された固定相を使用せずに、ベースラインで分離された対称ピークを示しました。 メソッドの検証は、ICH ガイドラインに従って行われました。 検量線は広い濃度範囲にわたって直線であり、計算された LOD 値は 0.02 ～ 0.09 µg/mL の範囲でした。 メソッドのグリーンネスは、分析エコスケール、GAPI、および AGREE 指標ツールを使用して評価されました。 さらに、オンラインサプリメントストアから購入した 4 つのランダムサンプル製品を分析しました。 結果として、いくつかの不正表示行為が証明されました。 私たちの発見を裏付けるために、標準添加を実行したところ、平均回収率は 96.67 ～ 101.44% で、測定間の標準偏差は 2.83 以下でした。

減量 現在、栄養補助食品 (DS) がインターネット上で流行しています。 それらは健康を維持し、美しい外見を実現するための安全で簡単な方法であると考えられています。 消費者は、これらの製品には天然成分が含まれており、市場に発売される前に安全性と有効性が十分にテストされていると誤って信じています。 残念ながら、これらの非処方箋製品は効果がなく、時には有害です。 1994 年の栄養補助食品健康教育法 (DSHEA) に従って、DS は純度、表示、安全性、有効性に関する市販前の承認を受けていません。 FDA は、市販後に重篤な有害事象または新たな科学的知見が報告された場合にのみ対応します。 したがって、不当表示詐欺は非常に一般的です。 成分は独自のブレンドとして記載されていることがよくあります。 さらに、これらの複数成分配合には、禁止成分が含まれているか、ラベルに記載されている実際の有効成分が含まれていません。 消費者は、適切にラベルが貼られた、よく知られた組成の製品を入手する必要があります。 したがって、適切な公的規制は必須です。 国立衛生研究所/栄養補助食品局 (NIS/ODS) は、いくつかの規制イニシアチブを実施し、信頼性の高い品質管理実践への道を開くために、DS 成分の標準標準物質と検証済みの分析方法の開発を奨励しています 1、2、3。

私たちのウェブ検索や地元のヘルスショップによると、現在一般に入手可能な痩身製剤には、天然源または合成類似体から抽出された幅広い成分が含まれています。 これらの OTC 製品で最も一般的に使用されている化合物には、トランス レスベラトロール、ラズベリー ケトン、フェネチルアミン化合物があります。 2-フェネチルアミン、p-シネフリン、p-オクトパミンおよびp-ホルデニン。 また、ほとんどの減量 DS では、高いカフェイン含有量が主要な側面であることも注目されています。

レスベラトロールは、真菌感染症や環境ストレスなどのストレス条件から身を守るために赤ブドウの皮に自然に存在するポリフェノールです。 抗酸化作用、抗炎症作用、心臓保護作用があることで広く知られています。 また、脂肪生成を誘導する調節因子を抑制する抗脂肪細胞であるため、抗肥満薬としても使用されます。 レスベラトロールにはトランス異性体とシス異性体の両方が存在します。 しかし、この形質転換体はより立体的に安定しており、豊富で生物学的に活性です4。 当社の文献レビューによると、サプリメント製品中のトランス レスベラトロールは、UV および蛍光検出を備えた逆相高速液体クロマトグラフィー 5、6、7、8、UV 検出を備えたフューズド コア カラム クロマトグラフィー 9、高速薄層クロマトグラフィー 10 などのいくつかの技術を使用して分析されました。 UV 検出 11 および電気化学的検出 12 を備えたキャピラリー電気泳動、定波長同期蛍光分光分析 7 および方形波 13、14、および差動パルスボルタンメトリー 15、16。

ラズベリーケトンは、ラズベリー果実の特徴的な風味を与える主要な芳香化合物です。 幅広い健康上の利点の中でも、抗肥満剤として人気があります。 脂肪分解を誘発し、腸の脂肪吸収を阻害します17。 天然ラズベリーケトンは、1965 年以来 GRAS (一般に安全と認められている) ステータスを保持しています18。減量 DS に豊富に含まれる成分ですが、その長期摂取による悪影響はまだ完全に特徴づけられていません。 マウスの血管内溶血、高血糖、用量関連死亡率を報告した研究はほとんどない19,20。 DS 製品のラズベリーケトンアッセイについては、フェニルカラムを使用したダイオードアレイ検出 21 や UV 検出 22 を備えた高速液体クロマトグラフィー法など、さまざまな方法が公開されています。 また、高速薄層クロマトグラフィー 22、IR 分光法 23、および蛍光分光法 24、25、26 の方法を使用して測定されました。

フェネチルアミン (PEA) は、減量処方中の食欲抑制剤、発熱剤、脂肪分解剤として見られる交感神経興奮剤です。 2-フェネチルアミンが最も豊富で、次にシトラス オーランティウムの成分が続きます。 p-シネフリン、p-オクトパミン、p-ホルデニン。 天然であるにもかかわらず、DS に含まれる大量の PEA は合成由来である可能性があります。 これらはエピネフリンやノルエピネフリンと構造的に似ており、体の自然な神経伝達物質システムに影響を与えます。 したがって、それらの安全性には疑問が残ります。 これらのアドレナリン刺激薬は、カフェインによってさらに強調される重篤な心血管有害事象を引き起こし、特に肥満者はすでに高いリスクにさらされています。 世界反ドーピング機関（WADA）は、2-フェネチルアミンとp-オクトパミンを禁止物質としてリストし、アスリートにおけるこれらの乱用パターンを監視するため、2021年の監視リストにp-シネフリン、p-ホルデニン、カフェインを含めた。 しかし、それらは依然として一般の人々に見られる2,27。 私たちの知る限り、PEA の定性的スクリーニングまたは定量のための分析方法が公開されています。 これらには、酸性過マンガン酸カリウム化学発光を使用するモノリシックカラムクロマトグラフィー 28、UV 検出を使用する逆相高速液体クロマトグラフィー 29,30,31,32,33,34,35,36,37、蛍光検出 29,32,38 および質量検出 33,35,39 が含まれます。 、40、41、質量検出付きガスクロマトグラフィー42、キャピラリー電気泳動43、方形波および差動パルスボルタンメトリー44、45、およびNMR分光法46。

現在までのところ、前述の減量成分を同時にアッセイするための一般的な方法は文献にありません。 p-シネフリン、p-オクトパミン、および p-ホルデニン 32,38,40、および場合によってはカフェインとの混合物の分離については、いくつかの方法しか発表されていません 31,36。 適切な製品ラベル付けには、信頼性の高い検証済みの分析方法が必要であり、普遍的な方法が依然として不可欠です。

ここでは、規制研究所での品質管理の実践に現実的に適用できる汎用性の高い方法を提案することを目的としました。 我々は、フォトダイオードアレイ検出器を使用して、カフェイン、トランスレスベラトロール、ラズベリーケトン、p-オクトパミン、p-シネフリン、p-ホルデニンおよび2-フェネチルアミンを同時に測定するための、検証済みの逆相高速液体クロマトグラフィー法を開発しました。 分離は、アセトニトリルと酸性化水のみを使用して、短い操作時間で均一濃度で達成されました。 ICH ガイドラインに従って正式な検証が行われ、オンラインの健康ショップから購入したランダムな DS サンプルの分析に方法が適用されました。

無水カフェイン (1, 3, 7-トリメチルプリン-2, 6-ジオン、CAS 番号 [58-08-2]、99.5% 以上であることが認定)、2-フェニルエチルアミン HCl (CAS 番号 [156-28-5] ]、98.0% 以上であることが認定されています）、p-ホルデニン HCl (4-(2-(ジメチルアミノ) エチル) フェノール塩酸塩、CAS 番号 [6027-23-2]、99.5% 以上であることが認定されています)、p-オクトパミンHCl (4-(2-アミノ-1-ヒドロキシエチル) フェノール塩酸塩、CAS 番号 [770-05-8]、99.5% 以上であることが証明されています)、p-シネフリン HCl (4-[1-ヒドロキシ-2-(メチルアミノ) エチル] フェノール塩酸塩、CAS 番号 [5985-28-4]、99.5% 以上であることが証明)、トランス レスベラトロール (トランス-3, 5, 4'-トリヒドロキシスチルベン、CAS 番号 [501-36-0] ]、99.0% 以上であることが証明されています）およびラズベリー ケトン（4-(4-ヒドロキシフェニル)-2-ブタノン、CAS 番号 [5471-51-2]、99.5% 以上であることが証明されています）は中国 (Baoji Guokang) から購入されました。バイオテクノロジー株式会社）; アセトニトリル、水 (Fisher Chemical、英国)、および 85% オルトリン酸 (Merck、ダルムシュタット、ドイツ) は HPLC 試薬グレードでした。

分析は、第 4 級溶媒システム、インライン真空脱気装置、100 μl 注入ループを備えた HPLC Waters Alliance e2695 分離モジュール (Waters Co.、MA、USA) を使用して実施しました。 オートサンプラー、加熱カラムコンパートメント、およびフォトダイオードアレイ (PDA) 検出器。 分析カラムは RP Spherisorb® ODS-2 でした。 250 × 4.6 mm、粒子サイズ 5 μm (Waters Co.、MA、米国)。 Empower-3 クロマトグラフィー データ ソフトウェアをデータの収集と取得に使用しました。 カラムコンパートメントとサンプルトレイは 25 °C に保たれました。 移動相は、アセトニトリル：0.1％リン酸（50：50％v/v）の混合物でした。 20 μl のサンプルを 3 回注入し、流速 0.9 mL/min で均一濃度に溶出しました。 総実行時間は 11 分で、1 回の注入の間にカラムを移動相で 5 分間平衡化しました。 PDA 検出は、カフェインおよび 2-フェニルエチルアミンについては 205 nm、ラズベリー ケトン、p-オクトパミン、p-シネフリンおよび p-ホルデニンについては 225 nm、トランス レスベラトロールについては 305 nm で実行されました。 分離効率はシステム適合性の結果によって検証されました。

減量を目的とした 4 つの異なる栄養補助食品サンプルをオンライン健康ショップから購入しました。 サンプル (1) には、無水カフェイン、シネフリン HCl、およびオクトパミン HCl の独自ブレンド 280 mg が含まれると表示されていました。 タブレットごとに。 サンプル (2) には、125 mg の 2-フェニルエチルアミン HCl、80 mg の無水カフェイン、15 mg のホルデニン HCl、および 1 mg のシネフリン HCl が含まれていると主張されました。 タブレットごとに。 サンプル (3) は、400 mg のラズベリーケトン (4%)、400 mg のカフェイン、および 200 mg に相当するブドウ抽出物の混合物であると主張されていました。 カプセル1回分あたり。 サンプル (4) には、ラズベリーケトンパウダー 300 mg、緑茶葉エキス 200 mg、無水カフェイン 100 mg、およびアップルサイダービネガーパウダー、グレープフルーツパウダー、昆布パウダー、アサイーフルーツパウダー、アフリカンマンゴー種子エキス、および10% レスベラトロール抽出物; カプセル1回分あたり。 すべてのサンプルは有効期限前に分析されました。

アセトニトリル:水 (1:9、%v/v) に溶解したトランス レスベラトロールを除き、すべての薬物の別々の原液 (100 μg/mL) を水を使用して調製しました。 すべてのストック溶液は 4 °C で保存した場合、7 日間安定でした。 検量線を構築するための作業標準溶液は、移動相で原液を適切に直線状に希釈して新たに調製しました。

空のカプセルの内容物または 1 回分のサイズに相当する微粉末錠剤を正確に秤量し、水 (サンプル 1 および 2) またはアセトニトリル:水 (1:9、%v/v) (サンプル 3 および 4) に溶解し、10 分間超音波処理しました。各サンプルのろ過およびストック溶液を調製しました。 各サンプルの適切な希釈液を移動相で調製してキャリブレーション範囲内に収め、前述のクロマトグラフィー分離条件下で分析しました。 抽出効率は、標準的な添加技術を使用してさらに評価されました。 既知量の純粋な標準物質が市販サンプルに添加されました。 次に、これらの混合物に対してサンプルの調製と定量のステップ全体が行われました。 回収率は、スパイクされたサンプルの総濃度からスパイクされていないサンプルの濃度を差し引くことによって計算されました。

DS 規制が不十分であることを考慮すると、これらの製品に含まれるさまざまな成分を同時に同定および定量する分析法の存在は、健康監視の分野にとって非常に重要です。 この研究では、7 つの人気のある痩身化合物に光を当てています。 すなわち、カフェイン、トランス レスベラトロール、ラズベリー ケトン、p-オクトパミン、p-シネフリン、p-ホルデニン、2-フェネチルアミンです。 シンプルで環境に優しく、安価な RP-HPLC/PDA メソッドが開発され、それらを同時に測定できることが検証されました。 現在までに、単一化合物またはいくつかの化合物の組み合わせを定量するための分析方法が公開されています。 さらに、これらの方法は長い勾配プログラムを採用し、最小限の検証データを提案しています5、22、30、33。 したがって、この提案は、市販されているさまざまな DS 製品の品質管理のための、一般的に環境に優しく、シンプルで有効な方法として提案できます。

言及したすべての化合物の化学的調査において、当社は従来の ODS カラムを使用して非常に短い分析時間で最高の分離能、ピーク形状、感度を示す環境に優しいメソッドを開発することを目指しました。 分離されたすべての化合物を示すクロマトグラムを図 1 に示します。標準 C18 カラムは、品質管理ラボで最も人気があるため、推奨されました。 しかし、すべての分析物は塩基性親水性であり、未修飾の逆相シリカ上で塩基性 PEA を分離するのは困難でした。 中性の水の pH では、塩基性分析物はシラノール残基に強く保持されるため、関連するクロマトグラムにはピークが現れません。 低い pH では、非イオン化シラノールとイオン化した塩基性分析物によりイオン交換が制限され、化合物が溶出されます 47。 したがって、文献の方法では常に、長い実行時間で勾配移動相組成および/または勾配流量プログラムを通じて酸性緩衝剤またはイオン対剤（例：ヘプタンスルホン酸塩またはラウリル硫酸ナトリウム）を使用していました31,48。 これらの移動相添加剤はカラムの寿命を短くし、面倒なグラジエント手順は品質管理の実践には現実的ではありません。 有機酸修飾剤を使用する代わりに、移動相に低濃度のリン酸を使用する方法が文献に発表されているのは 2 つだけです。 オクトパミンとシネフリンのピークの間では、どちらも勾配移動相組成および/または流速勾配溶出を使用しているにもかかわらず、不十分な分解能が観察されました 36,37。 提案された方法は、移動相組成、流量、検出波長、注入量に関して最適化されました。 メタノール: 0.1% リン酸とアセトニトリル: 0.1% リン酸の混合物を、異なる割合と流量でテストしました。 アセトニトリルは、粘度が低く、UV カットオフが低いため、メタノールよりも有望でした。 メタノールクロマトグラムにはノイズが多く、これによりメソッドの感度が低下しました49。 アセトニトリル: 0.1% リン酸混合物を、30:70、50:50、および 70:30 (%v/v) の比率でテストしました。 アセトニトリル比が低い場合、オクトパミンとシネフリンのピークが共溶出しました。 酸性化水の割合が増加すると、塩基のプロトン化が相対的に増加し、カラム上での塩基の保持が減少しました。 アセトニトリル比が高い場合、最後の化合物はカフェインとトランス レスベラトロールのピークの共溶出とともに 30 分で溶出しました。 7 つの化合物の最良のベースライン分離は、アセトニトリル: 0.1% リン酸混合物 (50:50、%v/v) の定組成溶出で観察されました。 イソクラティック溶出は、ピーク間の分解能が 2 を超える満足のいくベースライン分離を提供するのに十分であり、以前に公開された手間のかかるグラジエント プログラムや移動相の有機修飾剤の必要性を排除しました。 ブランク溶媒サンプルを注入しましたが、実行間にキャリーオーバーは検出されませんでした。 さまざまなポンプ流量をテストしたところ、流量 0.9 mL/min がピーク間の最高の分解能を示し、実行時間は最小限で、最後の化合物は 9.76 分で溶出しました。 ラズベリーケトンとPEAはほぼ同様のUVスペクトルを示しましたが、最適化された条件下ではカラムからの溶出が異なりました。 各分析物はその λmax で検出されました。 カフェインおよび 2-フェネチルアミンの場合は 205 nm、ラズベリー ケトン、p-シネフリン、p-オクトパミンおよび p-ホルデニンの場合は 225 nm、トランス レスベラトロールの場合は 305 nm。 最適な注入量は 20 μl で、それを超えるとピークの形状が歪んでしまいました。 したがって、検出波長と注入量の両方がメソッドの感度に起因します。

カフェインおよび 2-フェネチルアミンについては 205 nm、ラズベリーケトン、p-オクトパミン、p-シネフリン、p-ホルデニンについては 225 nm、トランス レスベラトロール（2 μg/mL）については 305 nm での試験薬物の標準溶液の HPLC-PDA クロマトグラムそれぞれ）。

私たちが提案した方法のすべての検証パラメーターは、ICH Q2 (R1) ガイドラインに従って計算されました50。

提案されたクロマトグラフィー条件下では、すべての標的分析物がベースラインまで分離され、純粋な標準溶液と試験されたサプリメントサンプルの両方でよく分離されたピークが示されました。 代表的なクロマトグラム (図 1 および 2) では、研究対象の薬物の保持時間に干渉するピークは示されていません。

栄養補助食品サンプル (a サンプル 1、b サンプル 2、c サンプル 3、および d サンプル 4) の HPLC-PDA クロマトグラム。

研究対象の薬物について 5 ～ 7 点の検量線が作成され、選択された検出波長での平均ピーク面積と対応する濃度が相関し、回帰式が計算されました。 すべての直線性範囲と回帰パラメーターを表 1 に示します。すべての薬剤は、許容できる広い濃度範囲にわたって直線性を示し、相関係数値は 0.999 を超えていました。

メソッドの感度は、LOD 値と LOQ 値の観点から評価されました。 LOD と LOQ の決定は、検出限界 (σ) の範囲内の回帰直線の残留標準偏差と検量線の傾き (s) を使用した検量線データに基づいて行われ、式 LOD = 3.3 × σ/s および LOQ を適用しました。 = 10 × σ/秒。 結果を表 1 に示します。

精度は、直線範囲全体でさまざまな濃度の純粋な薬液を分析することによって評価されました。 精度の結果は、平均回収率として表されました。 パーセント相対標準偏差 (%RSD) は、同日および連続 3 日間に実行された各薬物の 3 つの異なる濃度の 3 回の測定セットの間で計算され、日内および日間の精度の両方を表現しました。 それぞれ。 表 1 に示す計算結果は、100% に近い回収率と 2% 未満の %RSD 値によって示されるように、この方法が正確で正確であることを証明しています。

System suitability testing evaluates the whole components of an analytical system and efficiency of separation. During method optimization, System suitability parameters were calculated using Empower® software as described in FDA guidance for industry on Validation of Chromatographic Methods and USP-NF General Chapter <621> Chromatography–system suitability Chromatography. 258–265 (2012)." href="/articles/s41598-022-24830-1#ref-CR51" id="ref-link-section-d39835053e1464"> 51. 選択した条件下では、結果 (表 2) は許容値内にあり、クロマトグラフィー システムが効率的で、よく分離された対称ピークを示していることが証明されました。 したがって、提案された方法は、その意図された目的に対して十分に有効です。

ロバストネステストは、動作条件の小さいが意図的な変動に対するメソッドの信頼性の程度を測定します。 また、重要なメソッドパラメータを強調表示し、制限を設定します。 ポンプ流量 (± 0.05 mL/min) および移動相組成 (± 2%) を変化させた後、同じ濃度レベルの複数のサンプルを分析し、代表的な変化ごとにアッセイの %RSD を計算しました。 結果 (表 3) は、この方法が流量の変化に対して堅牢であることを示しています。 ただし、移動相の組成は、ピーク間の分離に影響を与える重要なメソッドパラメータです。 移動相の 0.1% リン酸濃度を 2% 増加しても、% 薬物アッセイには影響しませんでしたが、ラズベリー ケトン-オクトパミンおよびオクトパミン-シネフリンのピークでは分解能が 1.74 および 1.81 に低下しました。 それぞれ。

検証の後、提案された方法の実行可能性が承認されました。 4 つの異なる DS サンプルをオンライン小売業者から購入し、前述の手順を使用して分析しました。 抽出は、レスベラトロールを含むと主張されるサンプルを除き、水を使用して単純に行われ、水中の 10% アセトニトリルが使用されました。 化合物は、関連する保持時間、UV スペクトル、およびスペクトル的に類似した化合物の既知量の純粋な標準を含むスパイクサンプルに基づいて同定されました。 代表的なクロマトグラム (図 3) では、関連する領域に干渉ピークは見られませんでした。 さらに、Empower® PDA ソフトウェアを使用してピーク純度試験を実行し、不純物または分解物が研究対象の化合物と共溶出する可能性を排除しました。 評価には、各ピークの純度角度と閾値角度を比較することが含まれていました。 純度角、つまりスペクトルの均一性の度合いは、ピークの各点にわたるスペクトルをピーク頂点のスペクトルと比較します。 閾値角度は、共溶出、ノイズ、溶媒および検出器の誤差に起因する可能な最大の純度角度です。 不純物は、その純度角度がしきい値角度を超えると、ピーク内で検出されます。 試験したすべての DS 製品において、研究対象の薬物に対応するピークは、スペクトルの均一性を示す閾値角度より低い純度角度を示し (表 4)、したがって、溶出ピークの純度が確認されました 52。

(a) GAPI - グリーン分析手順インデックス (b) AGREE - 提案手法の分析グリーンネス計算機による評価。

サンプル中の含有量が測定され、ラベルの表示に関連して比較されました。 次に、化合物をさらに特定し、抽出効率を評価するために、サンプルに既知量の純粋な標準物質を添加しました。 アッセイおよび標準添加の結果を表 4 に示します。

サンプル (1) および (2) については、測定された量はラ​​ベル上の量とかなりよく一致していました。 サンプル (1) には、多量のカフェインに加えて、安全レベルを超える p-シネフリンと p-オクトパミンの総摂取量が含まれていました2,53。 これはおそらく、各成分の正確な量を記載せずに混合物が独自のブレンドとして表示されたという、活性剤の含有量について消費者に誤解を与えようとする製造業者の意図を説明していると思われます。 サンプル (2) の分析結果はラベルの主張と一致しているにもかかわらず、禁止されている合成 2-フェネチルアミンが非常に高レベルで含まれており、依然として一般に販売されていることに注意することが重要です。 他のテストされたサンプルについては、実際の内容がラベルの主張と大きく異なることが結果からわかりました。 サンプル (3) には 100 mg のブドウ抽出物が含まれていると表示されていましたが、法 LOD を超えるサンプル (3) ではレスベラトロールは検出されませんでした。 さらに、表示されているラズベリーケトン含有量のほぼ半分が含まれていました。 同様に、サンプル (4) には、製品の主な活性剤として宣言されているにもかかわらず、標識されたラズベリー ケトンが約 3% 含まれていました。 調査結果の正確性を裏付けるために、欠陥のあるサンプルに標準的な添加が適用され、平均回収率は 96.67 ～ 103.33% の間で変化しました。

方法のグリーンネスは、「エコスケール」ツールを使用して評価されました。 評価では、危険性と使用される試薬の量、エネルギー使用、労働上の危険性、および廃棄物の発生が考慮されます。 各項目には多くのペナルティ ポイント (PP) が与えられ、合計 PP が理想的な合計スコア 100 から差し引かれます。エコスケール スコア >75、>50、または <50 は、優れた、許容できる、または不適切な環境の良さを表します。 それぞれ。 Namiesnik et al.54 の説明に従って計算されたエコスケール スコアは 90 であり、私たちの方法が優れた環境に優しい方法であることが証明されました (表 5)。

GAPI は、サンプル収集から準備、最終分析までの分析手順のすべての段階を評価する半定量ツールです。 また、方法が定性的であるか定量的であるかも示されます。 評価には、5 つの五芒星で構成される 3 色のシンボルが含まれます。 各セクションは、高、中、低の環境配慮度に応じて緑、黄、または赤に色付けされています。 それぞれ。 この指標は、さまざまな分析手法間の差異を視覚的に強調表示します55、56。 私たちが提案した分析方法の GAPI 評価は ComplexGAPI® ソフトウェア 57 を使用して計算され、結果は図 3a に示されています。

AGREE は、評価中にグリーン分析化学の 12 原則 (SIGNIFICANCE) を考慮する自動化された指標です。 各基準には 0 から 1 までのスコアが与えられます。最終結果は、12 のセグメントに分割されたピクトグラムです。 各セグメントは、その緑の度合いに応じて、異なる色の強度で緑、黄、または赤に色付けされます。 各セグメントの幅は、ユーザーが割り当てた重みに対応します。 最後に、分析手法全体の合計スコアがピクトグラムの中央に、このスコアに対応する色で表示されます。濃い緑色は 1 に近い値に関連付けられています。この方法は、その柔軟性の点でユニークであると考えられています。分析手法の危険性だけでなく、その結果も考慮しています58。 私たちが提案した分析方法の AGREE 評価は、AGREE® ソフトウェアを使用して計算され、結果が図 3b に示されています。

この原稿では、市場における DS の誤った表示の問題を評価しました。 減量 DS のアッセイでは、減量 DS に含まれる 7 種類の一般的な脂肪分解物質の分離と定量のために、ダイオード アレイ検出を備えたアイソクラティック RP-HPLC メソッドが開発されました。 提案された方法は環境に優しく、アセトニトリルと酸性化水のみを使用して、十分に短い実行時間で完全な分離を行います。 分離は効率的で、よく分解されたガウス形状のピークを示しました。 検証は ICH ガイドラインに従って行われ、その結果、このメソッドが幅広い濃度範囲にわたって高感度、正確、精密かつ堅牢であることが証明されました。 さらに、オンライン ストアからランダムに購入した 4 つの DS 製品の分析にも適用されました。 私たちの結果により、分析されたサンプルのうち 2 つにおいて、ラベルの付いた内容物と実際の内容物との間に不一致があることが明らかになりました。 他の 2 つのサンプルはラベルの主張に同意しました。 ただし、これら 2 つのサンプルには、すでに監視/禁止 WADA リストに載っているにもかかわらず、まだ一般に入手可能な、安全レベルを超えるカフェインと PEA が含まれていることは注意する価値があります。 最後に、私たちは、このシンプルで環境に優しく、効率的かつ費用対効果の高い手順が DS 規制慣行の強化に貢献すると信じています。

現在の研究中に生成および分析されたデータセットは、合理的な要求に応じて責任著者から入手できます。

この論文の訂正が公開されました: https://doi.org/10.1038/s41598-023-28976-4

Bailey, RL 米国における栄養補助食品の研究をサポートするための現在の規制ガイドラインとリソース。 クリティカル。 食品科学牧師ニュートル。 60、298–309 (2020)。

記事 Google Scholar

Pawar, RS & Grundel, E. 米国における栄養補助食品の規制の概要とフェネチルアミン (PEA) の混入の問題。 薬物検査。 アナル。 9、500–517 (2017)。

記事 CAS Google Scholar

ナバロ、V. et al. 米国では肝障害に関係するハーブや栄養補助食品の内容が誤って表示されることがよくあります。 ヘパトール。 共通。 3、792–794 (2019)。

記事 Google Scholar

Vincenzo, B.、Riccio, F.、Fonseca-santos, B.、Colerato, P. & Chorilli, M. トランス レスベラトロールの特性、生物学的特性および分析方法: 総説。 クリティカル。 アナル牧師。 化学。 50、339–358 (2020)。

記事 Google Scholar

Brizzi, A.、Brizzi, V. & Corradini, D. 迅速かつ簡単な RP-HPLC 法による栄養補助食品中のトランス レスベラトロールの同定と定量。 Ｊ．リク． クロマトグラム。 関連。 テクノロジー。 31、2089–2100 (2008)。

記事 CAS Google Scholar

Jagwani, S.、Jalalpure, S.、Dhamecha, D. & Hua, GS A 経口カプセルおよびナノリポソーム中のトランス レスベラトロールを推定するための逆相 HPLC 法を示す安定性。 アナル。 化学。 レット。 9、711–726 (2019)。

記事 CAS Google Scholar

Moreton-Lamas, E.、Lago-Crespo, M.、Lage-Yusty, MA、Lopez-Hernandez, J. 野菜サプリメント中のレスベラトロールの分析方法の比較。 食品化学。 224、219–223 (2017)。

記事 CAS Google Scholar

Omar、JM、Yang、H.、Li、S.、Marquardt、RR & Jones、PJH トランス -/シス -レスベラトロール、ケルセチン、およびエモジンの同時分析のための改良された逆相高速液体クロマトグラフィー法の開発市販のレスベラトロールサプリメントに含まれています。 Ｊ．アグリック． 食品化学。 62、5812–5817 (2014)。

記事 CAS Google Scholar

Solich, P.、Fibigr, J. & Satínsk, D. フューズドコアカラムクロマトグラフィーを使用した、レスベラトロールとポリダチンを含む栄養補助食品の保持特性と品質管理の研究。 Ｊ．Ｐｈａｒｍ． バイオメッド。 アナル。 120、112–119 (2016)。

記事 Google Scholar

Babu, SK、Kumar, KV & Subbaraju, GV 高速薄層クロマトグラフィーによるハーブ抽出物および剤形中のトランス レスベラトロールの推定。 化学。 薬局。 ブル。 53、691–693 (2005)。

記事 CAS Google Scholar

Orlandini, S.、Giannini, I.、Pinzauti, S. & Furlanetto, S. 栄養補助食品中のレスベラトロール分析のためのキャピラリー電気泳動法の多変量最適化と検証。 タランタ 74、570–577 (2008)。

記事 CAS Google Scholar

Gao, L.、Chu, Q. & Ye, J. 電気化学的検出を備えたキャピラリー電気泳動による、ワイン、ハーブ、健康食品中のトランス レスベラトロールの測定。 食品化学。 78、255–260 (2002)。

記事 CAS Google Scholar

Zhang, H.、Xu, L. & Zheng, J. レスベラトロールの陽極ボルタンメトリー挙動と医薬品剤形および尿中の電気分析による測定。 タランタ 71、19–24 (2007)。

記事 CAS Google Scholar

Yardim, Y. 方形波吸着ストリッピングボルタンメトリーを使用した、臭化ヘキサデシルトリメチルアンモニウムの存在下、ホウ素ドープダイヤモンド電極での栄養補助食品中のレスベラトロールの電気化学的測定。 Ｊ．セルビアン・ケミストリー（Ｓｅｒｂｉａｎ Ｃｈｅｍ．） 社会 82、175–188 (2017)。

記事 CAS Google Scholar

Liu、JX、Wu、YJ、Wang、F.、Gao、L. & Ye、BX グラファイト電極におけるレスベラトロールの吸着ボルタンメトリー挙動と錠剤剤形におけるその測定。 Ｊ．チャイニーズ・ケム． 社会 55、264–270 (2008)。

記事 CAS Google Scholar

クライン、RS et al. 未修飾のスクリーン印刷された電極に基づくポータブルデバイスを使用したトランスレスベラトロールの電気化学的検出。 Ｊ．Ｐｈａｒｍ． バイオメッド。 アナル。 207、114399–114407 (2021)。

記事 Google Scholar

ラオ、S.ら。 フェノール化合物の薬理学的探索 : ラズベリーケトン - 最新情報 2020. Plants 10, 1323–1339 (2021).

記事 CAS Google Scholar

Lee, J. ラズベリーケトンの生物学的活性と安全性についてはさらなる研究が必要です。 NFS 2、15–18 (2016)。

記事 Google Scholar

ハオ、L.ら。 マウスにおけるラズベリーケトン [4-(4-ヒドロキシフェニル)-2-ブタノン] の急性摂食抑制と毒性。 食品化学。 有毒。 143、111512 (2020)。

記事 CAS Google Scholar

Mir, TM、Ma, G.、Ali, Z.、Khan, IA & Mohammad, K. 正常マウス、肥満マウス、および健康が損なわれた肥満マウスに対するラズベリーケトンの効果: 予備研究。 J.ダイエット。 補足 18、1–16 (2021)。

記事 CAS Google Scholar

Al-othman, ZA、Al-warthan, A.、Aboul-enein, HY、Za'abi, M.、および Al Ali, I. ラズベリー ケトンとカフェインの PhE および PPF カラム分離の機械的アプローチ。 Ｊ．リク． クロマトグラム。 関連。 テクノロジー。 38、1324–1332 (2015)。

マギー、F.ら。 異常なラズベリーケトン含有量を含む栄養補助食品の分析。 J. 食品プロセス。 保存します。 41、13–19 (2016)。

Google スカラー

Aboul-Enein, HY、Antochi, OM、Nechifor, G. & Bunaciu, AA フーリエ変換赤外分光光度法を使用した栄養補助食品製剤中のラズベリーケトンの分析。 バイオアクトを開きます。 コンプ J. 7, 8–13 (2019)。

記事 Google Scholar

East, Y. 4-ヒドラジノ - 7-ニトロ - 2, 1, 3 - ベンゾオキサジアゾールによるプレカラム誘導体化後のフレグランス ミスト中のラズベリー ケトンの簡単な HPLC 蛍光測定。 J.アナル。 科学。 メソッドの楽器。 6、44–49 (2016)。

CAS Google スカラー

East, Y. (N -クロロホルミルメチル-N -メチルアミノ) によるプレカラム誘導体化後の HPLC 蛍光分析によるフレグランス ミスト中のラズベリー ケトンの定量方法の改良。 J.アナル。 科学。 メソッドの楽器。 8、17–24 (2018)。

CAS Google スカラー

Abdelaal, SH、El, NF、Hassan, SA & El-kosasy, AM 栄養補助食品の品質管理 : ラズベリー ケトンの経済的なグリーン分光蛍光分析アッセイとその体重変動試験への応用。 スペクトロチム。 アクタパートＡ Ｍｏｌ． バイオモル。 分光器。 261、120032–120038 (2021)。

世界反ドーピング機関。 禁止されている覚せい剤リスト。 https://www.wada-ama.org/en/content/what-is-prohibited/prohibited-in-competition/stimulants。

パーシー、DW 他酸性過マンガン酸カリウム化学発光検出を備えた HPLC を使用した Citrus aurantium プロトアルカロイドの測定。 タランタ 80、2191–2195 (2010)。

記事 CAS Google Scholar

Putzbach, K.、Rimmer, CA、Sharpless, KE & Sander, LC 紫外線吸収および蛍光検出を備えた液体クロマトグラフィーによる、栄養補助食品標準標準物質中のビターオレンジ アルカロイドの定量。 Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ． A 1156、304–311 (2007)。

記事 CAS Google Scholar

Roman, MC, Betz, JM & Hildreth, J. 紫外検出を備えた液体クロマトグラフィーによるビター オレンジの原料、抽出物、栄養補助食品中のシネフリンの定量: 単一研究室での検証。 J.AOAC国際 90、68–81 (2007)。

記事 CAS Google Scholar

Evans, RL & Siitonen, PH 高速液体クロマトグラフィーによる減量サプリメント中のカフェインと交感神経興奮性アルカロイドの定量。 Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ． 科学。 46、61–67 (2008)。

記事 CAS Google Scholar

ロレンツォ、CD 他 Citrus aurantium L を含む植物性栄養補助食品中の活性アミンを測定する HPLC 法の開発と検証。Food Control 46、136–142 (2014)。

記事 Google Scholar

Yun, J.、Kwon, K.、Choi, J. & Jo, CH LC-PDA および LC-MS/MS による栄養補助食品中のアンフェタミン様物質のモニタリング。 食品科学バイオテクノロジー。 26、1185–1190 (2017)。

記事 CAS Google Scholar

ロドリゲス、J. et al. 栄養補助食品中の 17 種類の混入物を特定する迅速なスクリーニング方法。 クロマトグラフィア 84、267–274 (2021)。

記事 Google Scholar

Yun, J.、Choi, J.、Jo, CH & Kwon, K. 2015 年から 2017 年までの痩身食品中の混入物としての合成抗肥満薬、デザイナー類似体、および減量成分の検出。J. Chromatogr。 9月 技術部 09、1000396–1000401 (2018)。

Google スカラー

Viana, C. et al. ブラジルの電子商取引で減量や体力づくりのために販売されている栄養補助食品に含まれるカフェインとアドレナリン作動性興奮剤の液体クロマトグラフィーによる測定。 食品添加物。 コンタム。 - パート A 33、1–9 (2015)。

記事 Google Scholar

Viana, C. et al. Citrus aurantium を含む医薬品に含まれる生体アミンの高速液体クロマトグラフィー分析。 食品添加物。 コンタム。 - パート A 30、634–642 (2013)。

記事 CAS Google Scholar

Gatti, R. & Lotti, C. 栄養補助食品および植物抽出物中の第一級フェネチルアミンの定量のための、蛍光検出を備えたプレカラム逆相液体クロマトグラフィー法の開発と検証。 Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ． A 1218、4468–4473 (2011)。

記事 CAS Google Scholar

Pawar, RS、Grundel, E.、Fardin-kia, AR & Rader, JI LC – MS / MS 法を使用した、アカシア・リギジュラ植物材料および栄養補助食品中の選択された生体アミンの定量。 Ｊ．Ｐｈａｒｍ． バイオメッド。 アナル。 88、457–466 (2014)。

記事 CAS Google Scholar

Pawar, RS、Sagi, S.、Leontyev, D. ビターオレンジ栄養補助食品の天然および合成フェネチルアミンの LC-MS/MS による分析。 薬物検査。 アナル。 12、1241–1251 (2020)。

記事 CAS Google Scholar

Hsien, A.、Koh, W.、Chess-williams, R.、Elizabeth, A. シトラス オーランティウムで標識されたプレワークアウト サプリメントの HPLC-UV-QDa 分析では、植物抽出物が含まれているのはごく一部であることが示唆されています。 Ｊ．Ｐｈａｒｍ． バイオメッド。 アナル。 193、113746–113754 (2021)。

記事 Google Scholar

Marchei, E.、Pichini, S.、Pacifici, R.、Pellegrini, M.、Zuccaro, P. ガスクロマトグラフィー質量分析による栄養補助食品中のシネフリンの定量のための迅速かつ簡単な手順。 Ｊ．Ｐｈａｒｍ． バイオメッド。 アナル。 41、1468–1472 (2006)。

記事 CAS Google Scholar

メルコリーニ、L.ら。 Citrus aurantium 果実および栄養補助食品のさまざまな部分に含まれるアドレナリン作動性アミンの高速 CE 分析。 J. Sep. Sci. 33、2520–2527 (2010)。

記事 CAS Google Scholar

Allahverdiyeva, S.、Keskin, E.、Pinar, PT、Yardim, Y. & Senturk, Z. ホウ素ドープ ダイヤモンド電極を使用した栄養補助食品中のホルデニンの定量のための最初の電気分析法。 電気分析 31、1–8 (2019)。

記事 Google Scholar

Haššo, M.、Sarakhman, O.、Stanković, DM & Švorc, L. ホウ素ドープ ダイヤモンド電極を使用した、栄養補助食品中のスポーツ パフォーマンスを向上させる興奮剤シネフリンを信頼性高く測定するための新しいボルタンメトリー プラットフォーム。 アナル。 方法 12、4749–4758 (2020)。

記事 Google Scholar

Zhao, J.、Wang, M.、Avula, B. & Khan, IA NMR アプローチによるスポーツ栄養補助食品中のフェネチルアミンの検出と定量。 Ｊ．Ｐｈａｒｍ． バイオメッド。 アナル。 151、347–355 (2018)。

記事 CAS Google Scholar

McCalley, DV 逆相 HPLC による塩基性化合物の分離における適用に適した固定相と最適条件の選択。 J. Sep. Sci. 26、187–200 (2003)。

記事 CAS Google Scholar

Rebiere, H.、Guinot, P.、Civade, C.、Bonnet, P. & Nicolas, A. ダイオードアレイ検出機能を備えた超高圧液体クロマトグラフィーを使用した、異物が混入した痩身製剤中の有害な減量物質の検出。 食品添加物。 コンタム。 パート A 29、161–171 (2012)。

記事 CAS Google Scholar

Snyder, LR、Kirkland, JJ & Glajch, JL 付録 II: HPLC で使用される溶媒の特性。 実践的なHPLCメソッドの開発 3、721–728 (2012)。

記事 Google Scholar

分析手順の検証: テキストと方法論 Q2(R1)、米国食品医薬品局。 分析手順の調和、検証に関する国際会議: テキストと方法論 Q2(R1)、米国食品医薬品局。 （2005年）。 https://doi.org/10.1590/s1984-82502011000100012。

クロマトグラフィー法の検証および USP General 200 Chapter <621> クロマトグラフィーに関する業界向けの FDA ガイダンス。 258–265 (2012)。

Karthikeyan, K.、Arularasu, GT、Ramadhas, R. & Pillai, CK d-サイクロセリン原薬の鏡像異性体純度測定のための間接 RP-HPLC 法の開発と検証。 Ｊ．Ｐｈａｒｍ． バイオメッド。 アナル。 54、850–854 (2011)。

記事 CAS Google Scholar

Biesterbos、JWH、Sijm、DTHM、van Dam、R. & Mol、HGJ 消費者への健康リスク: オランダにおける異物混入の栄養補助食品の存在。 食品添加物。 コンタム。 - パート A 36、1273–1288 (2019)。

記事 CAS Google Scholar

Gałuszka, A.、Migaszewski, ZM、Konieczka, P.、Namieśnik, J. 分析手順のグリーンネスを評価するための分析エコスケール。 TraAC トレンド アナル。 化学。 37、61–72 (2012)。

記事 Google Scholar

Płotka-Wasylka, J. 分析手順を評価するための新しいツール: グリーン分析手順インデックス。 タランタ 181、204–209 (2018)。

記事 Google Scholar

Gamal, M.、Naguib, IA、Panda, DS & Abdallah, FF ヒヨシンの分析のための最も環境に優しい分析方法を選択するための 4 つの環境評価ツールの比較研究: N -ブチル臭化物。 アナル。 方法 13、369–380 (2021)。

記事 CAS Google Scholar

Płotka-Wasylka, J. & Wojnowski, W. 補完的なグリーン分析手順インデックス (ComplexGAPI) とソフトウェア。 グリーンケム。 23、8657–8665 (2021)。

記事 Google Scholar

Pena-Pereira, F.、Wojnowski, W. & Tobiszewski, M. 同意 - 分析的な GREEnness メトリック アプローチとソフトウェア。 アナル。 化学。 92、10076–10082 (2020)。

記事 CAS Google Scholar

Linda, L. 査読者のガイダンス - クロマトグラフィー法の検証。 CDER。 セント。 薬物評価。 解像度 22、1–30 (1998)。

Google スカラー

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科学技術イノベーション資金庁 (STDF) がエジプト知識銀行 (EKB) と協力して提供するオープンアクセス資金。

アイン・シャムス大学薬学部製薬分析化学部門、カイロ、11566、エジプト

ノハ・F・エル・アザブ、サラ・H・アブデラール、アミラ・M・エル・コサシ

カイロ大学薬学部分析化学部、Kasr El-Aini Street、カイロ、11562、エジプト

A.ハッサンは言った

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NFE-A.: 概念化、リソース、形式分析、執筆 - レビューと編集。 SHA: 概念化、方法論、調査、形式分析、原案の作成。 SAH: 概念化、調査、検証、執筆 - レビューと編集。 AME-K.: 構想、監督、プロジェクト管理。

サラ・H・アブデラールへの通信。

著者らは競合する利害関係を宣言していません。

シュプリンガー ネイチャーは、発行された地図および所属機関における管轄権の主張に関して中立を保ちます。

この記事の元のオンライン版は改訂されました。この記事の元のバージョンには、著者 Noha F. El Azab のスペルに誤りがあり、誤って Noha F. El-Azab と表記されていました。

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転載と許可

エル・アザブ、NF、アブデラール、SH、ハッサン、SA 他栄養補助食品の誤表示: 品質管理のためのグリーン アイソクラティック HPLC メソッドの開発による、厳選された痩身製品に関するケーススタディ。 Sci Rep 12、22305 (2022)。 https://doi.org/10.1038/s41598-022-24830-1

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受信日: 2022 年 9 月 10 日

受理日: 2022 年 11 月 21 日

公開日: 2022 年 12 月 24 日

DOI: https://doi.org/10.1038/s41598-022-24830-1

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